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胰島細(xì)胞抗體ELISA試劑盒操作流程

更新時(shí)間:2017-08-01點(diǎn)擊次數(shù):1343
   胰島細(xì)胞抗體ELISA試劑盒基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。
  胰島細(xì)胞抗體ELISA試劑盒操作流程如下:
 ?。?)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
  (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
 ?。?)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
  (4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  (6)洗板,同(4)。
 ?。?)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
 ?。?0)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
 ?。?1)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
 ?。?2)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
 ?。?3)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
  胰島細(xì)胞抗體ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
  1.底物請(qǐng)避光保存。
  2.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
  3.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  4.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

TEL:22-83726755

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